一. 實驗前準備：

1.將(jiang)水浴鍋預熱至37℃

2.用75％酒(jiu)精擦拭(shi)紫(zi)外線照射30min的超(chao)凈(jing)工作臺臺面。

3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養瓶等等。
二．取出凍存管：

1.根據細胞凍存記(ji)錄按(an)標簽(qian)找(zhao)到所(suo)需細胞的編號。

2.從液氮罐中取出細胞盒，取出所需的細胞，同時核對管外的編號。
三．迅速解凍：

1.迅速將凍(dong)存管投入到已經預熱的(de)水浴鍋中迅速解凍(dong)，并要不斷的(de)搖動，使管中的(de)液體迅速融(rong)化。

2.約1-2min后凍存管內液體*溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，再拿入超凈臺內。
四.平衡離心：用架盤天平平衡后，放入離心機中3000r/min 離心3min
五.制備細胞懸液：

1.吸棄上清液。

2.向離心管內加入10ml培養液，吹打制成細胞懸液。
六.細胞計數：細胞濃度以5×105/ml為宜。
七.培養細胞：

將(jiang)復合細(xi)胞(bao)(bao)計數要求的(de)細(xi)胞(bao)(bao)懸(xuan)液(ye)分裝入(ru)培(pei)養(yang)瓶內(nei)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶放(fang)入(ru)37℃5％CO2的(de)培(pei)養(yang)箱內(nei)2-4小時（或者(zhe)24-48小時）后換液(ye)繼續(xu)培(pei)養(yang)培(pei)養(yang)，換液(ye)的(de)時間(jian)由細(xi)胞(bao)(bao)情況(kuang)而定。

初學者易犯錯誤：

1.一次復蘇細胞過多，忘記更換吸頭和吸管，導致細胞交叉污染。
 

2水浴(yu)鍋(guo)未預(yu)熱(re)或者未預(yu)熱(re)到37℃。

3.水(shui)浴鍋內凍存管(guan)太多，導致(zhi)傳(chuan)熱不佳，使融化時間延長。

4.離心前忘記(ji)平衡，導致離心機損壞和細胞(bao)丟失。